文献类型：学位论文

中文题名：重组人TRAIL蛋白的高密度发酵、包涵体复性及分离纯化研究

作者：沈亚领[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：杨胜利;华东理工大学|魏东芝;华东理工大学

授予学位：博士

语种：中文

中文关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL);大肠杆菌;流加策略;包涵体;TRAIL蛋白;分离纯化;抗肿瘤蛋白;发酵过程

摘要：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-RELATED APOPTOSIS INDUCING LIGAND,TRAIL/APO2L)是1995年被确认的肿瘤坏死因子超家族成员,在体外和体内,可溶性的TRAIL能迅速地诱导一系列肿瘤细胞的凋亡,而对正常组织细胞无毒性,因而是一种很有应用前景的抗肿瘤蛋白.采用分批补料的方式发酵重组大肠杆菌C600/PBV-TRAIL生产人可溶性TRAIL蛋白,优化发酵工艺,探索高密度下高表达的方法.在研究重组大肠杆菌C600/PBV-TRAIL生长特性,优化确定发酵培养基基础成分和发酵补料成分配比,确定外源蛋白诱导表达时间条件下,详细研究比较了以往高密度发酵采用的主要补料策略:间歇流加、恒速流加、指数流加,摸索归纳出一种全新的组合流加策略,即指数-恒PH混合流加策略,采用该流加策略有效地避免了发酵过程中,尤其是诱导阶段乙酸的积累,使TRAIL蛋白在高密度培养条件下得到高效表达.菌体密度最终达到65G/L(DCW),可溶性TRAIL蛋白占菌体总蛋白的4.2％,产量为1.4G/L.在整个发酵过程中,乙酸浓度接近于0,克服了乙酸在发酵过程中对TRAIL蛋白表达的严重抑制作用.为TRAIL的工业化生产创造了条件.