文献类型：会议论文

中文题名：葡聚糖酶在毕赤酵母中的表达与纯化及性质鉴定

作者：周祥山[1];陈琳[1];张元兴[1];范卫民[1];陆建[1];

机构：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海;

会议论文集：2008年全国酶制剂研究开发应用技术研讨会论文集

会议日期：20080600

会议地点：天津

主办单位：中国发酵工业协会

语种：中文

摘要：α葡聚糖酶在食品,医疗和制糖等行业上都有着广泛的应用前景。本研究首先从油脂酵母中克隆了葡聚糖酶DEX基因,构建入表达载体pPIC9k-His6中,然后在AOX1启动子的控制下,在毕赤酵母Gs115菌株中表达。通过在5L罐中107h的发酵,重组P．pastoris Mut+菌株的湿重达到 588．6g／L,萄聚糖酶的浓度和酶活分别达到0．445 g／L和83900 U/L。通过一步阳离子交换层析,收率为71．61％,酶比活为181．96 U／mg,纯化倍数为17．56倍。纯化得到的葡聚糖酶经过SDS—PAGE和western blotling检测,均显示为单一的带,说明通过离子交换一步纯化可得到电泳纯葡聚糖酶。纯化后的葡聚糖酶最适温度为30 ° C,最适pH为4．5。金属离子Al3+,Cu2+和Fe3+,及SDS能够完全抑制葡聚糖酶的活性,而Mg2+能够增强葡聚糖酶活性145％。