文献类型：学位论文

中文题名：西瓜炭疽病菌、菜豆炭疽病菌的分子检测

作者：唐建辉[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：王伟;华东理工大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：分子检测;西瓜炭疽病菌;菜豆炭疽病菌;炭疽病;基因组DNA

摘要：采用真菌核糖体基因转录间隔区域(ITS)通用引物，PCR扩增四个来自不同地方的西瓜炭疽病菌(COLLETETRICHUMORBICULARE)核糖体基因的ITS1和ITS2，并对PCR产物进行了克隆和序列分析。结果表明：西瓜炭疽病菌的ITS全长481BP，其中ITS1长163BP，5.8S长153BP，ITS2长165BP，各碱基A、T、G、C的个数分别为110、106、118、147，GC含量为55.1％。用MEGA3软件对此四个序列以及GENEBANK中登录的炭疽属其它24个种的ITS1和ITS2聚类分析，结果显示：COLLETETRICHUM属可以分为13个聚类组，各聚类组间存在着一定的遗传多样性，其中COLLETETRICHUMORBICULARE、COLLETETRIEHUMLINDEMUTHIANA在ITS1、ITS2上都聚为一组，这就为用ITS做为靶序列来设计特异性引物将COLLETETRICHUMORBICULARE、COLLETETRICHUMLINDEMUTHIANA与其他种分开提供了分子依据。 根据GENEBANK中COLLETETRICHUM属的24个种的ITS系列，比较设计出一对引物CY1/CY2，可以特异的从西瓜炭疽病菌C.ORBICULARE和菜豆炭疽病菌C.LINDEMUTHIANUM菌株中扩增到一条442BP的条带，将这两个种的炭疽菌和其它菌分开。进一步利用RAPD随机引物扩增C.ORBICULARE和C.LINDEMUTHIANUM，分别找出在C.ORBICULARE中和C.LINDEMUTHIANUM中的特异性条带，经过克隆、测序后，设计出两对SCAR引物RB/RC，CD1/CD2。引物RB/RC可以特异的在C.ORBICULARE中扩增出一条216BP的条带，将C.ORBICULARE和C.LINDEMUTHIANUM分开；引物CD1/CD2可以特异的在C.LINDEMUTHIANUM中扩增638BP的条带，将C.LINDEMUTHIANUM和C.ORBICULARE分开。进一步将引物CY1/CY2，RB/RC组成双重PCR，建立西瓜炭疽菌的分子检测体系，检测灵敏度可达1PG基因组DNA。将引物CY1/CY2，CD1/CD2组成双重常规PCR以及双重荧光PCR，建立菜豆炭疽菌的分子检测体系，检测灵敏度也可达1PG基因组DNA。国内外首次为西瓜炭疽病菌、菜豆炭疽病菌的准确鉴定和采前、采后炭疽病的快速、准确的检测提供了技术和方法。