文献类型：期刊文献

中文题名：人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆、测序及表达

英文题名：Cloning, Sequencing and Expression of Human Copper, Zinc superoxide Dismutase cDNA

作者：施惠娟[1];范立强[1];魏东芝[1];袁勤生[1];孙建新[2];吴祥甫[2]

机构：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;[2]中国科学院上海生物化学研究所

年份：1999

卷号：31

期号：1

起止页码：16

中文期刊名：生物化学与生物物理学报

收录：CSTPCD;;Scopus;CSCD:【CSCD2011_2012】；PubMed;

语种：中文

中文关键词：表达载体;基因克隆;基因表达;Cu,Zn-SOD

外文关键词：Copper,zinc superoxide dismutase; expression vector; gene cloning; gene expression; E.coli

摘要：用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ），以人胎肝组织总ＲＮＡ为模板，扩增了人铜锌超氧化物歧化酶（ｈＣｕ，ＺｎＳＯＤ）的ｃＤＮＡ，并进行序列分析，将该ｈＣｕ，ＺｎＳＯＤｃＤＮＡ重组到Ｔ７启动子控制下的分泌型表达载体ｐＥＴ２２ｂ（＋）中，构建表达质粒ｐＥＴＳＯＤ，并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明，经１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基硫代βＤ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后，可高效表达一分子量为１９ｋＤ的蛋白质，与抗人ＳＯＤ多抗有特异的免疫反应，表达量约为菌体总蛋白质的３０％，具有特异性ＳＯＤ酶活性，酶活力可达１７９７ｕ／ｍｌ培基。
The cDNA encoding the human copper,zinc superoxide dismutase(Cu,Zn SOD) was amplified from the human liver by RT PCR and sequenced. The cloned human Cu,Zn SOD cDNA was ligated into expression vector pET 22b(+) under T7 promotor. After 3 h induction with 1 mmol/L IPTG, human Cu,Zn SOD was highly expressed in E.coli BL21(DE3). The expression product was up to 30% of the total protein of the bacteria in soluble form, which had specific SOD activity.