文献类型：学位论文

中文题名：功能化重链亚基铁蛋白纳米粒子的制备及其乳腺癌细胞靶向的研究

作者：李旭[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：曹旭妮;华东理工大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：乳腺癌;重链亚基铁蛋白纳米粒子;药物载体;表皮生长因子受体;靶向治疗;肿瘤诊断

摘要：人重链铁蛋白(FTHl)能精确组装为纳米笼状结构,并因其在人体内的普遍存在而具有很高的生物安全性。但由于纳米粒子本身不具备特异性靶向功能,便限制了其在癌细胞成像和药物传递方面的应用。表皮生长因子受体(EGFR)在包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤组织中过量表达,已成为癌症治疗的一个特异性靶点。本课题以铁蛋白重链亚基为基本载体,通过基因工程手段对重链铁蛋白进行功能化修饰,并对纳米粒子的组装情况和功能化进行表征,同时还考察了纳米粒子对乳腺癌细胞的靶阿及内化特性。研究共可分为三部分:<br>　　(1)通过基因工程手段将EGF作为靶向分子修饰于重链亚基铁蛋白的外部,制备一种新的纳米材料EGF::FTHl。FEM结果显示纳米粒子的大小为11.8±1.8nm且粒径分布狭窄。并且,EGF::FTHl能有效圭邀与过表达EGFR的乳腺癌细胞MCF-7结合,但不能有效地与正常乳腺细胞MCF-10A结合,同时未修饰靶向分子EGF的apoferritin与MCF-7基本没有结合。除此之外,体外MTT实验证明EGF::FTHl在工作浓度下不会影响细胞的生长。因此,EGF::FTHl在癌症靶向性成像与给药方面是一种很有前景的纳米粒子。<br>　　(2)将anti EGFR scFv(简称scFv)通过基因手段修饰于铁蛋白重链亚基的N端。结果表明,由于较大的空间位阻的影响,单独scFv::FTHl亚基不能有效组装为特征结构,为此我们将未经修饰的小分子量的FTHl(free his)亚基与seFv::FTHl亚基以一定比例混合后杂合复性,以减小空间位阻,FEM结果表明FTHl(free his)/scFv::FTHl纳米粒子正确组装为特征的笼状结构,流式细胞仪的结果表明该纳米粒子能有效地和乳腺癌细胞结合。此外,还通过EGF::FTHl和scFv::FTHl两种亚基的杂合复性,初步获得与癌细胞具更强结合的双靶向分子修饰的铁蛋白纳米粒子。这种杂合复性的新方法不但可以协助大分子修饰的铁蛋自纳米粒子的整体组装,更为对蛋白类纳米载体进行其它癌细胞表面特异性抗原的单链抗体的靶向修饰及双靶向分子的修饰提供了一种新的方法和思路。<br>　　(3)为了提高铁蛋白纳米粒子的内化效果,我们将EGF::FTH1和scFv::FTHl分别与穿膜肽修饰的TAT::FTHl亚基通过包涵体杂合复性成功制备正确组装的EGF::FTHl/TAT::FTHl和scFv::FTHl/TAT::FTHl纳米粒子,荧光显微镜结果显示TAT的修饰有效增强了FTHl纳米粒子在MCF-7中的内化效果,这为多功能化铁蛋白纳米粒孑的制备及其在肿瘤诊断和治疗方面的临床应用提供了一个新的视角。<br>　　综上所述,这几种铁蛋白纳米粒子的成功制备为肿瘤靶向性成像及给药提供了一类新的纳米载体,同时为功能化蛋白类纳米粒子的制各提供了新的方法。此外,本论文还详细探讨了铁蛋白纳米粒子对乳腺癌细胞的靶向和内化特性,为纳米粒子的临床应用提供了理论依据。<br>