文献类型：学位论文

中文题名：里氏木霉共表达体系的构建及纤维素酶制剂的开发

作者：孟凡举[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：杨胜利;华东理工大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：里氏木霉;表达载体;共表达;碱性纤维素酶

摘要：丝状真菌里氏木霉是目前已知生产纤维素酶能力最强的菌株,具有优异的分泌表达蛋白的能力,在工业上广泛应用于纤维素酶制剂的生产。但其生产的纤维素酶是酸性纤维素酶,在中碱性环境下几乎没有任何活性,这限制了纤维素酶在纺织工业中的应用。 为开发适用于纺织工业的纤维素酶制剂,本文共从以下两个方面展开了研究。一、通过数据库挖掘,克隆了5个纤维素酶基因在里氏木霉内进行表达,其中重组菌株pWEF31-V3所产酶液的CMCNa酶活的最适pH从5.0提高到6.0,在pH5-7的范围内可保持最高酶活（pH6.0）的80%以上,pH8.0下酶活可达到38.3±6.8IU/mL,为最高酶活的37.2%。二、为进一步在里氏木霉内共表达多蛋白,本研究基于生物砖基本理念,构建了一系列可用于在里氏木霉内表达目的蛋白的表达载体,并对这些表达载体的表达效率和特点进行了详细的研究。分别使用含有cbhⅠ、cbhⅡ启动子的两个表达载体,实现了碱性纤维素内切酶基因V3和碱性纤维素外切酶基因H2在里氏木霉内的共表达。共表达菌株s-pSB101-V3-pSB401-H2生产的酶液在pH8.0下的纤维素酶活及生物石洗效果均好于重组菌株s-pSB101-V3。本研究构建的载体使在里氏木霉内共表达蛋白变得简单易行。