文献类型：期刊文献

中文题名：凋亡素融合蛋白的基因克隆、表达与体外活性分析

英文题名：Cloning and Expression of TAT-apoptin and Its Activity Study in vitro

作者：赵健[1];高鹏[1];李素霞[1];袁勤生[1];刘建文[1]

机构：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237

年份：2009

卷号：35

期号：2

起止页码：202

中文期刊名：华东理工大学学报（自然科学版）

外文期刊名：Journal of East China University of Science and Technology

收录：CSTPCD;;Scopus;北大核心:【北大核心2008】；CSCD:【CSCD2011_2012】；

语种：中文

中文关键词：TAT-凋亡蛋白;高表达;纯化;MTT(四甲基偶氧唑盐)

外文关键词：TAT-apoptin; over-expression; purification; MTT （3-（4, 5-Dimethylthigal-2-yl）-2, 5- diphenyltetragalium bromide）

摘要：来源于HIV-1病毒（47-57位氨基酸）的TAT小肽具有跨膜功能,可以将外源蛋白进行跨膜转运。通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增了TAT-凋亡蛋白序列,与载体pET-28b连接后在大肠杆菌BL21（DE3）中获得了高表达,以包涵体形式表达的TAT-凋亡蛋白在变性条件下进行了Ni-NTA纯化,纯化的蛋白经MTT法证明具有诱导HeLa细胞凋亡的能力。
A basic peptide derived from human immunodeficiency virus HIV-1 TAT peptide （positions 47--57） can translocate through the cell membranes, the characteristics of which are utilized for the delivery of exogenous proteins into cells. The coding sequence for the TAT-apoptin was amplified by polymerase chain reaction（PCR）, then inserted into pET28b vector and highly expressed in Escherichia coli BL21 （DE3）. The protein expressed in inclusion body was purified by Ni-NTA under denaturing condition. Apoptosis activity of the TAT apoptin was evaluated by MTT. Results indicated that HeLa cells were highly sensitive to the purified TAT apoptin.