文献类型：会议论文

中文题名：黄杆菌肝素酶Ⅱ的克隆及表达

作者：傅文彬[1];赵健[1];宋聿文[1];范立强[1];李素霞[1];袁勤生[1];

机构：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;

会议论文集：2006第六届中国药学会学术年会论文集

会议日期：20061100

会议地点：中国广东广州

主办单位：中国药学会

语种：中文

中文关键词：HpaII;克隆表达;酶活性;包涵体复性

摘要：目的获得高表达黄杆菌肝素酶Ⅱ工程菌。方法本文用一对特异性引物通过PCR从黄杆菌(Flavobacterium heparinum)基因组DNA中扩增出黄杆菌肝素酶Ⅱ(HpaII)基因,经测序验证后插入到含T7启动子的质粒pET-24a上构建表达载体,重组质粒转化E.coli BL21(DE3),以1mM IPTG进行诱导表达。结果SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,该工程菌可表达与预期大小相符的约88kD的融合表达蛋白,在20度和37度培养条件下分别得到上清和包涵体,包涵体表达量占全菌体蛋白20%以上,且复性后的包涵体肝素酶活性达500Ul-1OD-1600