文献类型：学位论文

中文题名：人羊膜间充质干细胞微载体悬浮培养及成骨诱导

作者：周倩[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：周燕;华东理工大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：人羊膜间充质干细胞;微载体;成骨诱导;Ⅰ型胶原;流体刺激

摘要：人羊膜间充质干细胞(Human Amnion Mesenchymal Cells，hAMCs)不仅具有向三个胚层方向分化的能力，而且易获得，伦理争议小，具抗炎性和免疫耐受性等优点，因此在科学研究及临床应用中极具潜力。<br>　　 本文考察hAMCs在微载体动态与二维静态培养体系中的扩增、代谢及对数生长期收获的细胞集落形成能力、多向分化能力；并进一步比较了hAMCs在微载体动态和二维静态成骨诱导体系中的增殖、代谢及成骨分化，初步探讨了微载体培养体系中流体刺激与Ⅰ型胶原包被对在成骨诱导培养基中生长的hAMCs的增殖与成骨分化的影响，以期建立集扩增和分化诱导为一体的hAMCs体外培养系统。<br>　　 研究结果表明，在微载体cytodex3悬浮培养系统中采用间歇搅拌、4％FBS、半量体积接种后，贴附率提高至(86.3±2.5)%，hAMCs培养12d后，获得的最高细胞数是二维静态培养的26倍。与二维静态培养相比，微载体培养条件下hAMCs的葡萄糖利用率更高，收获的细胞具有更高的集落形成率(P＜0.05)、成骨和成脂肪的潜能(P＜0.05)。在14d的成骨诱导培养中，微载体动态诱导培养体系中获得的最高细胞数约是二维静态诱导组的26倍，乳酸产率、渗透压及pH的波动均低于相对应的二维静态培养体系，碱性磷酸酶活性、胞外钙基质含量等均高于静态培养(P＜0.05)。进一步研究表明，流体刺激与Ⅰ型胶原包被对hAMCs形态无显著影响，但流体刺激可显著抑制hAMCs的增殖(P＜0.05)，而Ⅰ型胶原包被对hAMCs的增殖没有明显的促进作用(P＞0.05)，但两者均可促进hAMCs的碱性磷酸酶活性、钙含量，且两者作用具叠加效果。