文献类型：期刊文献

中文题名：人Mn SOD cDNA的克隆及高效表达

英文题名：Cloning and Expression of Human Manganese superoxide Dismutase cDNA

作者：施惠娟[1];贺华君[2];魏东芝[2];袁勤生[2];陈哲宇[2];李明峰[2];吴祥甫[2]

机构：[1]中国科学院上海生物化学研究所,上海200031;[2]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,生物化学研究所,上海200237

年份：1999

卷号：31

期号：6

起止页码：707

中文期刊名：生物化学与生物物理学报

收录：CSTPCD;;Scopus;CSCD:【CSCD2011_2012】；PubMed;

语种：中文

中文关键词：锰;超氧化物歧化酶;表达载体;基因克隆;基因表达

外文关键词：manganese superoxide dismutase; expression vector; gene cloning; gene expression; E.coli

摘要：用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） ， 以人肝细胞株（Ｌ０２） 总ＲＮＡ 为模板， 扩增了人锰超氧化物歧化酶（ｈＭｎＳＯＤ） 的ｃＤＮＡ， 重组到Ｔ７ 启动子控制下的表达载体ｐＥＴ２４ａ（ ＋） 中， 构建表达质粒ｐＥＴＭｎＳＯＤ， 并转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３） 。ＳＤＳＰＡＧＥ及蛋白质印迹分析表明， 经１ ｍ ｍｏｌ／Ｌ 异丙基硫代βＤ半乳糖苷（ＩＰＴＧ） 诱导后， 可高效表达一分子量为２２ ｋＤ的蛋白质， 与抗人ＭｎＳＯＤ多抗有特异的免疫反应， 表达量约为菌体总蛋白质的５０％ ， 具有特异性ＳＯＤ 酶活性， 酶比活可达３８７ ．５ ｕ／ｍｇ。
The cDNA encoding human manganese superoxide dismutase was amplified from the human liver cell (L02) total RNA by RT PCR and sequenced. The human Mn SOD cDNA was ligated into expression vector pET 24a(+) under T7 promoter. After 5 h induction with 1 mmol/L IPTG, 800 μmol/L Mn 2+ , human Mn SOD was highly expressed in E.coli BL21(DE3). The protein product was up to 50% of the bacteria total protein in soluble form, and had specific SOD activity.