文献类型：学位论文

中文题名：在不同宿主中表达链霉菌磷脂酶D的研究

作者：张莹[1];

机构：[1]华东理工大学;

导师：杨胜利;华东理工大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：磷脂酶D;链霉菌;异源表达;组成型启动子

摘要：磷脂酶D (PLD)的转磷脂酰反应是合成自然界稀有的、高附加值磷脂化合物的最有效途径,这类磷脂化合物是药品,化妆品和食品行业的重要原料,因此磷脂酶D大规模工业化生产一直是迫待解决的问题。在磷脂酶D大家族中,放线菌来源的内源性PLD和植物及真菌来源的PLD相比,除具有较高的反应活性外,更兼具转磷脂酰选择性高,底物选择性广泛,催化结构最紧密以及在温度和有机介质稳定性高等方面的优势,被广泛应用于工业中磷脂以及磷脂衍生物的高效合成。本研究对土壤中筛选到的链霉菌来源磷脂酶D的高效安全异源表达和同源组成型表达进行了尝试和探索,构建了大肠杆菌E.coli,毕赤酵母Pichia pastoris和解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica三种异源重组表达系统表达磷脂酶D,首次实现了链霉菌属磷脂酶D在酵母系统中的异源表达,同时在大肠杆菌中系统中发现了磷脂酶D对异源表达宿主生长具有抑制作用,这可能是其在异源宿主中表达量不理想的重要原因。同时构建了2个组成型大肠杆菌-链霉菌穿梭表达质粒,实现了磷脂酶D在同源的变铅青链霉菌Streptomyces lividans TK24中的高效表达,摇瓶发酵的最高水平达到58U/ml,且表达条带单一,易于纯化分离,为进一步的产业化应用提供了有益的探索。