文献类型：期刊文献

中文题名：氧化葡萄糖杆菌ddsA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

英文题名：Cloning of the ddsA Gene from Gluconobacter oxydans and Its Expression in Escherichia coli

作者：张安[1];吴海珍[1];周雪峰[1];张惠展[1];张嗣良[1]

机构：[1]华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237

年份：2002

卷号：28

期号：3

起止页码：321

中文期刊名：华东理工大学学报（自然科学版）

外文期刊名：Journal of East China University of Science and Technology

收录：CSTPCD;;Scopus;北大核心:【北大核心2000】；CSCD:【CSCD2011_2012】；

基金：国家自然科学基金资助项目 ( 2 9776 0 1 7)

语种：中文

中文关键词：氧化葡萄糖杆菌;ddsA基因;克隆;大肠杆菌;表达

外文关键词：decaprenyl diphosphate synthase; Gluconobacter oxydans ; ddsA ; ubiquinone (Q) 10; gene expression

摘要：聚十异戊烯焦磷酸合成酶催化异戊烯二磷酸与丙烯基二磷酸发生连续的缩合反应生成聚十异戊烯焦磷酸 ,构成辅酶 Q1 0 的侧链。将氧化葡糖杆菌 ( Gluconobacter oxydans)的染色体 DNA用 Eco RI酶切 ,回收 5 .0 kb左右的片段为模板 ,通过 PCR扩增得到了聚十异戊烯焦磷酸合成酶基因 ( dds A)。测序分析表明该基因有一个 95 1 bp的开放型阅读框架 ,氨基酸序列与其他聚戊烯焦磷酸合成酶具有高度同源性 ( 30 %～ 5 0 %)。将 dds A基因克隆到 p UC1 9载体上得到 p UC- GZH表达质粒 ,将其转入大肠杆菌 JM83宿主 ,经 IPTG诱导表达融合蛋白 ,在聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( SDS-PAGE)的
Decaprenyl diphosphate (decaprenyl PP)synthase catalyzes the consecutive condensation of isopentenyl diphosphate with allylic diphosphate to produce decaprenyl PP, which is used for the side chain of ubiquinone (Q) 10. The genomic DNA of Gluconobacter oxydans was digested with Eco RI. Eco RI fragments of approximately 5.0 kb were isolated as templates for PCR. The gene of decaprenyl diphosphate synthase was obtained after several cycles of PCR. Sequence analysis revealed the presence of an ORF of 951bp capable of encoding a polypeptide that displays high similarity(30%～50%) to other prenyl diphosphate synthase. The ddsA was cloned into a pUC19 vector to form a transcription plasmid pUC GZH.After its transformation into E.coli JM83 and induction by IPTG, the recombination strain containing pUC GZH expressed a apparent fusion protein band on SDS PAGE, whose molecular weight was 37ku.