成果/Result
- 不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素的影响被引量：66收藏
- 作者：周祥山 范卫民 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物工程学报》 2002
- 关键词：甲醇 流加策略 重组毕赤酵母 高密度发酵 水蛭素
- 摘要：考察了不同甲醇流加策略对毕赤酵母高密度发酵生产水蛭素的影响。溶氧控制法不能有效地防止甲醇的过量流加。气相色谱离线检测法虽然防止了甲醇流加过量 ,但甲醇浓度的波动较大。利用甲醇传感器在线检测控制甲醇的流加可维持较恒定的甲醇...
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- 应用流式细胞术检测毕赤酵母的细胞活性被引量：24收藏
- 作者：肖安风 周祥山 周利 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2006
- 关键词：流式细胞术 检测 毕赤酵母 细胞活性
- 摘要：选取两种细胞活性染色试剂二乙酸荧光素(fluoresceindiacetate,FDA)和碘化丙锭(propidiumiodide,PI),应用流式细胞术(flowcytometry,FCM)检测毕赤酵母细胞活性。比较F...
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- 毕赤酵母发酵液的脱色和重组水蛭素的分离被引量：22收藏
- 作者：周卫斌 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物工程学报》 2001
- 关键词：重组水蛭素 脱色 分离 毕赤酵母 表达
- 摘要：用毕赤酵母表达重组水蛭素的发酵液中含有大量色素和一些杂蛋白。本文对发酵上清的脱色和重组水蛭素的分离进行了探讨。鉴于水蛭素的稳定性 ,用加热法预处理发酵上清取得了满意的效果。对离子交换、疏水层析、凝胶过滤、羟基磷灰石吸附层...
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- 实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数被引量：16收藏
- 作者：宣姚吉 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《中国生物制品学杂志》 2009
- 关键词：实时荧光定量PCR 毕赤酵母 基因拷贝数
- 摘要：目的建立实时荧光定量PCR检测毕赤酵母基因组中外源基因拷贝数的方法。方法采用双标准曲线法,分别利用含有GAP基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒,进行实时荧光定量PCR反应,建立标准曲线。将含有外源GFP基因的毕赤酵母...
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- 流式细胞术检测毕赤酵母发酵过程中胞内活性氧水平被引量：14收藏
- 作者：肖安风 周祥山 周利 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物工程学报》 2006
- 关键词：流式细胞术 毕赤酵母 活性氧 细胞活性
- 摘要：以2′,7′-二氢二氯荧光黄双乙酸钠(DcfH-DA)和碘化丙锭(PI)为标记探针,通过DcfH-DA/PI双染色与PI单染色的对照,检测毕赤酵母胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平...
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- 甲醇抑制时重组毕赤酵母发酵的特性研究被引量：14收藏
- 作者：周祥山 范卫民 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物工程学报》 2003
- 关键词：甲醇 重组毕赤酵母 发酵 真核表达系统 恒化培养 底物抑制 比生长速率
- 摘要：本文对毕赤酵母进行了恒化培养研究。以甲醇为唯一碳源时 ,在稀释率较低时 (D <0 0 4 8h- 1 ) ,连续培养系统操作很稳定。但在稀释率高时 (D >0 0 4 8h- 1 ) ,连续培养系统的定态点不止一个...
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- 重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解被引量：12收藏
- 作者：周祥山 周卫斌 范卫民 张元兴 董美玉
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《中国生物制品学杂志》 2003
- 关键词：重组毕赤酵母 高密度发酵 表达 水蛭素 生成 降解
- 摘要：目的 研究重组毕赤酵母高密度发酵表达水蛭素过程中产物的生成和降解。方法 通过质谱和氨基酸序列分析确定水蛭素的 4种活性异构体 ,再用HPLC监测发酵过程中水蛭素的降解情况。结果 发酵过程中产生了 4种具有较高比活的水蛭素...
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- 毕赤酵母发酵生产中的水蛭素降解顺序被引量：9收藏
- 作者：杨继忠 周祥山 解锡军 尤金花 张元兴 解福生
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;山东东阿阿胶股份有限公司
- 来源：《微生物学通报》 2004
- 关键词：毕赤酵母 水蛭素 降解 裂解液
- 摘要：水蛭素 (rHV2 Lys4 7)是一个具有 65个氨基酸的抗凝活性肽。在毕赤酵母高密度发酵分泌表达过程中 ,发酵上清中可检出 4个水蛭素活性组份 ,分别为Hir65及其C 末端切除 1～ 3个氨基酸的Hir64、Hi...
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- 海洋真菌灰绿曲霉蓝光感应基因Agwc1的克隆、鉴定与序列分析被引量：7收藏
- 作者：方喆 周祥山 张健 张盈 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物技术通报》 2010
- 关键词：灰绿曲霉 海洋丝状真菌 WC-1蛋白 蓝光感应 序列分析
- 摘要：蓝光感应系统在不同的光感应过程中都起到十分关键的作用,这些生理过程包括无性/有性发育,昼夜节律钟,次级代谢产物的生成等。为了对蓝光感应系统作进一步的研究,通过简并引物PCR和基因组走读方法得到了海洋真菌灰绿曲霉蓝光调节受...
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- 基于RNA-Seq技术的毕赤酵母基因组重注释及新型强启动子的发现与序列分析被引量：5收藏
- 作者：亓飞 蔡孟浩 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《华东理工大学学报（自然科学版）》 2014
- 关键词：毕赤酵母 RNA-Seq 基因组重注释 启动子
- 摘要：使用RNA-Seq技术,对毕赤酵母进行了转录组测序。基于测序结果,对现有毕赤酵母基因组进行了重注释,修正了基因组序列中的错误位点861处,发现了新转录本249个及可变剪切现象83个,并更正了553个转录本的错误注释。经过...
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- 毕赤酵母重组菌株直接基因缺失方法的研究被引量：3收藏
- 作者：倪振华 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2007
- 关键词：毕赤酵母重组菌 基因缺失
- 摘要：毕赤酵母重组菌在表达外源蛋白时往往存在比较严重的蛋白降解现象,一种可供选择的解决办法就是将其中起作用的某种蛋白酶基因缺失,但目前国内外研究主要集中于非重组毕赤酵母的基因缺失,直接对重组菌进行基因缺失的研究较少。以现有的毕...
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- 毕赤酵母己糖运载体HXT1基因缺失菌株的构建被引量：3收藏
- 作者：张文文 张平 宣姚吉 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2009
- 关键词：毕赤酵母 己糖运载体 G418抗性 基因缺失
- 摘要：葡萄糖在酵母胞内的转运是依靠己糖运载体家族成员完成的。目前在酿酒酵母中已鉴定了18个己糖运载体基因,各自功能也已得到深入的研究。然而在作为优良蛋白表达系统的毕赤酵母中,目前国内外尚未有此类基因的相关报道。本文基于酵母同源...
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- 两段发酵法培养重组酿酒酵母生产乙肝表面抗原被引量：2收藏
- 作者：张凌 周祥山 邵明非 范卫民 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《华东理工大学学报（自然科学版）》 2005
- 关键词：重组酿酒酵母 乙肝表面抗原 HBsAg 质粒
- 摘要：通过具有选择性压力合成培养基的使用和大豆蛋白胨的补加,建立了两段法重组酿酒酵母表达乙肝表面抗原的发酵生产工艺,使总的抗原表达量比原始批培养提高了25%,单位菌体抗原表达量提高了68%。对合成培养基和过程进行了优化,降低了...
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- 鲑鱼降钙素前体多肽在毕赤酵母中的分泌表达被引量：2收藏
- 作者：季青 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《中国医药工业杂志》 2007
- 关键词：鲑鱼降钙素 前体 毕赤酵母 分泌表达
- 摘要：将鲑鱼降钙素前体多肽(sCTGly)基因克隆到表达载体pPIC9K上,然后转化毕赤酵母营养缺陷型菌株GS115,利用酿酒酵母分泌信号肽α-factor将目的产物分泌到发酵上清液中。经组氨酸缺陷筛选、G418高拷贝筛选及摇...
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- 海洋红树林内生真菌产抗肿瘤活性化合物1403C发酵条件的优化被引量：2收藏
- 作者：康丽 蔡孟浩 范卫民 陆健 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物技术通报》 2011
- 关键词：Halorosellinia sp.(No.1403) 丝状真菌 发酵 优化 pH剪切力
- 摘要：旨在考察pH、溶解氧和剪切力对Halorosellinia sp.(No.1403)发酵过程的影响。结果表明,在发酵中后期及整个发酵过程中控制发酵液的pH恒定对菌体的生长影响不明显,但在不同发酵时期控制不同的恒定pH值对...
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- 毕赤酵母表达人胰岛素前体的纯化和N末端不均一性分析被引量：2收藏
- 作者：刘海峰 周祥山 庞甲佩 刘立岗 胡永水 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;山东阿华生物药业有限公司;山东东阿阿胶股份有限公司
- 来源：《华东理工大学学报（自然科学版）》 2013
- 关键词：毕赤酵母 胰岛素前体 反相层析 MALDI—TOF—MS N末端测序
- 摘要：利用毕赤酵母生产人胰岛素前体时,在胰岛素前体的N末端引入一段由lO个氨基酸组成的间隔肽(EEAEAEAEPK)虽然可以提高目的产物的表达量,但间隔肽中的多个酶切位点有可能造成目的产物N末端的不均一性。对毕赤酵母分泌表达的...
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- 流体剪切敏感型海洋灰绿曲霉AgugtA和AgugeA基因的克隆及功能分析被引量：1收藏
- 作者：胡伟 李佳欣 李晓霞 蔡孟浩 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物工程学院
- 来源：《华东理工大学学报(自然科学版)》 2015
- 关键词：海洋灰绿曲霉 剪切敏感 细胞壁合成 UgtA UgeA
- 摘要：摘要:海洋灰绿曲霉HB1—19的高度剪切敏感性给反应器发酵造成很大困难。曲霉中的UDP-半乳糖基转移酶UgtA和UDP-葡萄糖差向异构酶UgeA对细胞壁的合成起着重要的作用。本文拟研究海洋灰绿曲霉中这两种酶在细胞壁合成中...
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- 海洋灰绿曲霉AgveA基因响应盐度胁迫的功能分析被引量：1收藏
- 作者：李佳欣 刘绍梅 任燕娜 周祥山 蔡孟浩 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《华东理工大学学报（自然科学版）》 2018
- 关键词：灰绿曲霉 盐度胁迫 细胞发育 真菌形态 VeA蛋白
- 摘要：通过染色体步移方法克隆了基因AgveA、AgfphA、AglreA和AglreB的上下游侧翼序列,并通过逆转录确定了各个基因的内含子序列。通过实时荧光定量PCR发现,基因AgveA转录受盐度胁迫的作用下调较明显,而Agf...
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- 代谢途径抑制剂及前体对海洋红树林内生真菌No.1403产抗肿瘤化合物1403C的影响被引量：1收藏
- 作者：余超 周祥山 康丽 邹武 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器国家重点实验室
- 来源：《生物技术通报》 2010
- 关键词：红树林内生真菌 蒽醌 抑制剂 前体 聚酮途径
- 摘要：采用酶抑制剂法和前体喂养试验法初步研究了结构新颖的活性蒽醌化合物1403C的合成途径。研究表明,甲羟戊酸合成途径的关键酶抑制剂邻氨基苯甲酸、柠檬酸三钠对单位菌体1403C产量影响比较小;莽草酸途径关键酶氨基苯甲酸合成酶的...
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- 海洋真菌灰绿曲霉地标蛋白编码基因AgTeaA的克隆与序列分析被引量：1收藏
- 作者：张盈 沈伟 蔡孟浩 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《生物技术通报》 2011
- 关键词：灰绿曲霉 极化生长 地标蛋白 基因克隆
- 摘要：为考察灰绿曲霉中地标蛋白AgTeaA对菌丝极化生长的作用,首先需要获得AgTeaA基因序列的相关信息。通过简并PCR的方法得到AgTeaA基因编码区的一段序列,以已知序列为基础通过染色体步移的方法获得基因全长及两端侧翼序...
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- 比生长速率和氮源对毕赤酵母生产重组鲈鱼生长激素的影响被引量：1收藏
- 作者：魏春 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2008
- 关键词：巴斯德毕赤酵母 胞内生产 指数流加 比生长速率
- 摘要：对毕赤酵母胞内表达重组鲈鱼生长激素(rljGH)的发酵罐上生产进行了研究。建立了指数流加甲醇的策略并考察了不同比生长速率对rljGH生产的影响。结果表明,随着比生长速率的增加,平均比生产速率相应增加,但是胞内持续积累rl...
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- 葡萄糖诱导型AOX1启动子毕赤酵母突变株B5的筛选被引量：0收藏
- 作者：柏鹏 蔡孟浩 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器国家重点实验室
- 来源：《工业微生物》 2013
- 关键词：毕赤酵母 AOX1启动子 葡萄糖 异源蛋白
- 摘要：在毕赤酵母表达系统中,AOX1启动子被广泛应用于驱动异源蛋白的表达,但是AOX1启动子的活性严格依赖于甲醇的诱导。本文成功筛选到一株毕赤酵母紫外诱变随机突变株B5,该突变株可以在葡萄糖碳源中表达Aox酶。利用绿色荧光蛋白...
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- 海洋灰绿曲霉聚酮合酶基因的克隆与序列分析被引量：0收藏
- 作者：李晓霞 蔡孟浩 胡伟 李佳欣 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物工程学院
- 来源：《华东理工大学学报(自然科学版)》 2014
- 关键词：灰绿曲霉 聚酮合酶 灰绿霉素A Agpks1
- 摘要：为了研究海洋灰绿曲霉中抗肿瘤聚酮化合物灰绿霉素A的生物合成机制,需获得相关的聚酮合酶基因簇。根据灰绿霉素A合成途径推断,该化合物母核由非还原型PKS(NR-PKS)催化合成,本文使用LC系列简并引物得到灰绿曲霉中NR-P...
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- 两种融合蛋白的亲和柱上酶切被引量：0收藏
- 作者：刘海峰 周祥山 庞甲佩 解锡军 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;山东东阿阿胶集团阿华生物药业;山东东阿阿胶集团阿华生物药业
- 来源：《中国医药工业杂志》 2005
- 关键词：融合蛋白 酶切 纯化 r-PA IL—11衍生物
- 摘要：对两种融合表达的药物蛋白尝试了固相柱上酶切的方法,即Trx-r-PA、GST-IL-11融合蛋白分别在ETI-SepharoseFF、GST-Agarose亲和柱上酶切,酶切效率均高于液相酶切法。
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- 海洋真菌Xylaria sp.(No.2508)生产xyloketal B的发酵优化被引量：0收藏
- 作者：牛传朋 蔡孟浩 李晓霞 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《工业微生物》 2012
- 关键词：Xylaria sp.(No.2508) Xyloketal B 发酵优化 pH 接种量 大孔树脂XAD-16
- 摘要：对海洋真菌Xylaria sp.(No.2508)生产xyloketal B的摇瓶发酵过程进行了初步优化。结果表明,Xylaria sp.(No.2508)在培养120h时xyloketal B产量最高,当培养168 h...
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- 家驴基因组高度重复DNA序列的分离及其文库的构建被引量：0收藏
- 作者：赵英杰 吕品 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物工程学院/生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《华中农业大学学报》 2011
- 关键词：高度重复序列 分离 纯化 羟基磷灰石色谱 Cot文库 家驴
- 摘要：为研究家驴基因组重复序列,通过2次羟基磷灰石柱层析,分离纯化家驴Cot 0-Cot 0.1之间的基因组高度重复DNA序列,用于构建家驴基因组Cot文库,并向GenBank提交了18条重复序列,其中4条含有LINEs序列片...
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- 受体型酪氨酸激酶PDGFRβ在毕赤酵母中的表达与纯化被引量：0收藏
- 作者：茆建胜 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2009
- 关键词：受体酪氨酸激酶 PDGFRβ 毕赤酵母 表达
- 摘要：构建了受体酪氨酸激酶PDGFRβ的融合表达载体pPIC3.5K-PDGFRβ,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G4l8高拷贝菌株筛选,以及摇瓶诱导表达筛选,得到一株高表达PDGFRβ毕赤酵母菌株M3。对...
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- ErbB2受体酪氨酸激酶激酶区的表达与纯化被引量：0收藏
- 作者：江希 周祥山 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《微生物学通报》 2008
- 关键词：受体酪氨酸激酶 毕赤酵母 克隆 表达 RTK活性
- 摘要：以GFP融合表达的形式在毕赤酵母中表达具有生物活性的受体酪氨酸激酶ErbB2的激酶区。构建受体酪氨酸激酶激酶区与GFP的融合表达载体pPIC3.5K,转化毕赤酵母GS115,通过组氨酸营养缺陷型筛选,G418高拷贝菌株筛...
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- 外源有机酸对红树林内生真菌发酵生产1403C的影响被引量：0收藏
- 作者：周卫强 蔡孟浩 沈处 李倩倩 周祥山 张元兴
- 机构：生物反应器工程国家重点实验室
- 来源：《工业微生物》 2014
- 关键词：外源有机酸 内生真菌 1403C 柠檬酸
- 摘要：本文主要研究了外源有机酸对红树林内生真菌No.1403发酵生产1403C的影响,并且分别在摇瓶和5 L反应器进行柠檬酸(钠)的间歇性补加实验。研究发现在新培养基条件下添加丙二酸前体对1403C产量无促进作用。摇瓶发酵前期...
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- 胞外唾液酸酶造成工程中国仓鼠卵巢细胞株所产人源重组促红素唾液酸含量降低被引量：0收藏
- 作者：刘颖慰 周祥山 刘海峰 宋志伟 张元兴
- 机构：华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室;山东阿华生物药业有限公司;新加坡科技研究局生物过程技术研究所
- 来源：《生物工程学报》 2012
- 关键词：中国仓鼠卵巢细胞株 人源重组促红素 N-糖基化 细胞活性 唾液酸酶
- 摘要：为了对工程中国仓鼠卵巢(CHO)细胞所产人源重组促红素(rhEPO)的N-糖基化特点进行考察,静置培养工程细胞后,通过等电聚焦和凝集素共沉淀对培养上清中的rhEPO进行分析,并对无血清培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)和唾液...
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